Il kit di real-time PCR Toxoplasma gondii DNA, codificato TOXODNA.CE, è finalizzato alla rilevazione del DNA di Toxoplasma Gondii in campioni biologici umani (plasma e liquido amniotico). La presenza di un controllo interno (IC) di estrazione e/o amplificazione permette di monitorare l’intero processo.
Il saggio TOXODNA.CE è stato standardizzato verso il primo WHO Standard Internazionale per Toxoplasma gondii (Codice NIBSC 10/242) al fine di esprimere la concentrazione dei controlli positivi sia in tachizoiti/ml sia in Unità Internazionali (UI/ml).
L’utilizzo del kit è compatibile con strumenti real-time ABI 7500 Sequence Detection System® (Software SDS versione 1.3.1, Applied Biosystems™*) oppure MX3000P (Software MxPro versione 4.01, Stratagene™***).
NTRODUZIONE
Il parassita Toxoplasma gondii è ampiamente diffuso nella popolazione umana e si stima che colpisca fino a un terzo della popolazione mondiale.
Si tratta di un protozoo intracellulare obbligato appartenente al Phylum Apicomplexa, sottoclasse Coccidia, che infetta i vertebrati a sangue caldo, compreso l’uomo.
Il genoma è di circa 80 Mb di dimensioni e consta di 11 cromosomi.
La modalità più importante di trasmissione dell’infezione all’uomo è attraverso l’ingestione di carne poco cotta contenente l’organismo incistato. Gli animali di allevamento della catena alimentare sono riserve significative di T. gondii, il che è importante in quanto possibile via di trasmissione all’uomo, e inoltre la toxoplasmosi provoca anche perdite veterinarie significative.
RINCIPIO DEL TEST
Il kit TOXODNA.CE si basa su una chimica real-time che utilizza primer e probe specifici.
Il DNA di Toxoplasma gondii, purificato dal campione biologico in esame attraverso una fase di estrazione, viene amplificato utilizzando il sistema di amplificazione real-time. Il prodotto amplificato viene determinato mediante probe marcato con sostanze fluorescenti (reporter dye), specifico per una sequenza genomica di T.gondii ad alta ripetizione (da 200 a 300 volte).
Il controllo interno (IC) eterologo funge da controllo di estrazione e/o di amplificazione per ogni singolo campione, con l’obiettivo di identificare eventuali inibitori della reazione.
Come controlli della reazione di PCR sono forniti un controllo positivo alto (CTRL-H) e un controllo positivo basso (CTRL-L).
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