Il kit Real Time PCR Legionella Pneumophila Qualitative, identificato con il codice LEPDNA.CE, è destinato alla determinazione qualitativa in campioni biologici del DNA di Legionella Pneumophila con controllo simultaneo della reazione di amplificazione, mediante un Controllo Interno (I.C.).
L’utilizzo del kit è compatibile con strumenti real-time ABI 7500 Sequence Detection System® (Software SDS versione 1.3.1, Applied Biosystems™*) oppure MX3000P (Software MxPro versione 4.01, Stratagene™***).
NTRODUZIONE
La Legionella pneumophila, un batterio mobile gram-negativo, asporigeno, è l’agente eziologico della legionellosi. I sintomi clinici possono variare da un quadro patologico con febbre di gravità lieve (febbre di Pontiac) ad una polmonite ad evoluzione rapida, potenzialmente letale (malattia del legionario). La L. pneumophila è causa comune di polmoniti nosocomiali e di polmoniti acquisite in viaggio oltre ad essere una delle tre principali cause di polmonite sporadica acquisita in comunità, insieme alle specie batteriche Mycoplasma pneumoniae e Clamydia pneumoniae. I primi ceppi di legionella sono stati isolati nel 1943 e classificati come organismi simili a rickettsie, mentre il genere è stato definito nel 1979, dopo una vasta epidemia di polmonite che aveva colpito 3 anni prima un gruppo di veterani della legione Americana. Successivamente a questo evento, è stato classificato un ampio spettro di specie di legionella, al momento il genere comprende 50 specie e 16 sierogruppi distinti di L. pneumophila. Le Legionelle sono ampiamente diffuse in tutto il mondo in ambienti acquatici naturali e artificiali e sopravvivono in una vasta gamma di condizioni ambientali.
RINCIPIO DEL TEST
Il kit LEPDNA.CE si basa su una chimica real-time che utilizza primer e probe specifici.
Il DNA di Legionella pneumophila, recuperato dal campione biologico in esame attraverso una fase di estrazione, viene amplificato utilizzando il sistema di amplificazione real-time. Il prodotto amplificato viene determinato mediante probe con reporter a colorante fluorescente specifico per Legionella pneumophila.
Il controllo interno (IC) eterologo funge da controllo dell’estrazione/dell’amplificazione per ogni campione trattato singolarmente, con l’obiettivo di identificare eventuali inibitori della reazione. Come controlli della reazione di PCR sono forniti un controllo positivo alto (CTRL-H) e un controllo positivo basso (CTRL-L).
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