Il kit per PCR real-time HSV2 DNA Quantitation (QT), codificato HSV2DNAQT.CE, è destinato alla determinazione quantitativa del DNA del virus Herpes Simplex di tipo 2 nel plasma umano e nel liquido cerebrospinale con controllo simultaneo della reazione di estrazione/amplificazione mediante un controllo interno (IC).
Il kit è stato adattato per il suo utilizzo sui termociclatori real-time ABI 7500 Sequence Detection System® (Software SDS versione 1.3.1, Applied Biosystems™*) oppure MX3000P (Software MxPro versione 4.01, Stratagene™***) e CFX96 (Software CFX manager versione 1.7, Biorad™**).
NTRODUZIONE
L’HSV-2 è un membro della sottofamiglia delle Alphaherpesvirinae. Le infezioni da virus Herpes simplex (HSV) sono molto comuni e la sieroprevalenza negli adulti va dal 10 al 25% per l’HSV-2. Le infezioni da HSV nei soggetti immunocompetenti normalmente non causano problemi di salute significativi. L’HSV-2 è comunemente associato all’herpes genitale. L’HSV può riattivarsi nel sistema nervoso centrale e causare un’ampia serie di sintomi clinici dalla meningite lieve (di Mollaret) all’encefalite grave con un tasso di mortalità anche del 70% in assenza di terapia. L’HSV-1 e l’HSV-2 hanno comportamenti diversi nel sistema nervoso centrale (SNC). L’HSV-2 è associato a meningite, sia durante infezioni primarie o in concomitanza a riattivazioni genitali cliniche e subcliniche. L’infezione primaria dei neonati o la riattivazione dell’HSV nei soggetti immunocompromessi può essere associata a un’incidenza maggiore di meningite, encefalite grave e pericolose infezioni oculari.
RINCIPIO DEL TEST
Il kit HSV2DNAQT.CE si basa su una chimica real-time che utilizza primer e probe specifici.
Il DNA dell’HSV2, recuperato dal campione biologico in esame attraverso una fase di estrazione, viene amplificato utilizzando il sistema di amplificazione real-time. Il prodotto amplificato viene determinato e quantificato sulla base di una curva standard mediante probe marcato con sostanze fluorescenti (reporter dye),specifico per una sequenza genomica unica dell’HSV2.
Il controllo interno (IC) eterologo funge da controllo dell’estrazione/dell’amplificazione per ogni singolo campione, con l’obiettivo di identificare eventuali inibitori della reazione.
Viene fornita una curva standard per permettere la determinazione del carico virale.
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