Il kit codificato HBVDNAQT.CE è destinato alla rilevazione quantitativa del DNA del virus dell’epatite B in Real Time PCR nel plasma umano con simultaneo controllo della reazione di Estrazione/Amplificazione attraverso l’utilizzo di un Controllo Interno (IC) eterologo.
Il kit deve essere usato in combinazione con osservazioni cliniche e con altri marcatori di laboratorio quale indicatore prognostico dell’evoluzione della malattia e come ausilio nella valutazione della risposta al trattamento terapeutico.
Il kit è stato adattato per l’utilizzo su strumenti di Real-Time PCR quali ABI 7500 Sequence Detection System® (Applied Biosystems™*) software SDS 1.3.1 or MX3000P® software MxPro 4.01(Stratagene™*** ).
NTRODUZIONE
Il virus dell’epatite B è un virus appartenente alla famiglia degli Hepadnavirus. Il suo genoma è un piccolo ds DNA circolare, incompleto che diviene un genoma completo (cccDNA) e super-avvolto quando il virus penetra negli epatociti dell’ospite. Recentemente sono stati identificati otto genotipi (da A a H). Il virus ha un’alta velocità di replicazione ed un’elevata frequenza di mutazione. Queste mutazioni causano l’accumulo in ogni individuo infettato di numerose varianti genetiche chiamate “quasi specie”. Numerose prove dimostrano che la storia naturale e la risposta al trattamento terapeutico può cambiare in relazione al genotipo di HBV infettante. Tuttavia la reale correlazione tra il genotipo e il decorso clinico non sono completamente compresi. L’infezione virale da epatite B è un problema di salute pubblica globale coinvolgente 350 milioni di persone nel mondo. Essa può progredire in una forma cronica (CHB) o può essere causa di malattia epatica o di carcinoma epatocellulare (HCC). Attualmente numerose osservazioni cliniche dimostrano che la gravità del danno epatico è modulata dalla forza della risposta immunitaria. In base a ciò è possibile riconoscere due tipi di infezione: acuta e cronica.
RINCIPIO DEL TEST
Il kit HBVDNAQT.CE si basa sulla tecnologia Real Time PCR per individuare e quantificare l’HBV DNA nei campioni di plasma.
La specificità del test è in primo luogo garantita dalla selezione di specifici primers e sonde così come dalla scelta di stringenti condizioni di reazione.
L’HBV DNA, proveniente dal campione di plasma è estratto e amplificato insieme con la sequenza non correlata (IC) introdotta in ogni campione biologico all’inizio della preparazione del campione. Attraverso l’utilizzo del Controllo Interno (IC) è possibile monitorare che l’intero processo di estrazione/amplificazione si realizzi adeguatamente per ogni campione anlizzato.
Il prodotto di amplificazione è individuato e quantificato, rispetto alla curva standard, usando una sonda con sequenza specifica per l’HBV recante un reporter dye fluorescente. La costruzione della curva standard permette la determinazione della carica virale.
Il sistema è calibrato sul World Helath organization (WHO) 2nd International Standard for Hepatitis B virus (NIBSC Code 97/750).
I risultati sono riportati in Unità per millilitro (UI/ml) o copie/ml.
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